在实验室养细胞的过程中，你是否曾经历过细胞培养不佳的情况？胎牛血清（FBS）是细胞培养中不可或缺的重要成分，对培养效果起着至关重要的作用。本文将汇总一些实用技巧，帮助你更好地使用胎牛血清，确保细胞健康生长，别忘了收藏哦！

胎牛血清的储存方法

通常情况下，胎牛血清应储存于-20℃的环境中。如果需要长时间保存，最好将其放置在-80℃的冷冻库中，并尽量避免多次冻融。如果必须多次解冻，建议提前将血清分装成便于使用的小瓶，这样可以在每次需要时取出相应的量直接解冻，也可以选择小规格的50mL装，使用更加便利。

胎牛血清的解冻过程

解冻时，最好将胎牛血清从低温环境中取出后，放入2-8℃的冰箱中慢慢解冻（可过夜），待其部分融化后在室温下完成全部解冻。在此过程中，定期轻轻摇动瓶身以促进液体的混合。这种解冻方式能够有效减少沉淀的形成。因此，不推荐直接将血清从低温环境转移到25-37℃下解冻，因为温度骤变容易导致沉淀产生，并且在高温下停留过久可能会影响血清中某些成分的活性，从而影响细胞的培养状态和增殖速率。

胎牛血清中的沉淀物及处理方法

在解冻后，胎牛血清中可能会出现沉淀，这些沉淀可能包括纤维蛋白、脂蛋白、冷凝集素及磷酸钙等。纤维蛋白是一种常见的沉淀，肉眼可见，通常因纤维蛋白原在解冻后凝结形成。去除沉淀物的有效方法是通过离心（例如以400-600g离心5分钟）来获得上清液。而过滤则不推荐，因为容易导致过滤膜阻塞或营养成分的损失。

血清是否需要额外过滤？

血清在出厂前都会经过严格的无菌检测，一般情况下，不需要额外的过滤。如果考虑到沉淀物，建议通过离心去除。在必要时，可以在加入培养基后再次过滤，以减少营养成分的损失。

细胞的正确消化方法

当细胞密度达到约80%时，可以进行消化步骤。使用PBS多次冲洗细胞，并将预先配置好的胰酶（通常为0.25%浓度）在37℃培养箱中预热。通常，T25培养瓶中加入1mL胰酶，消化时间一般为2-5分钟，观察细胞是否已变为松散且呈圆形状态。若未达到理想状态，继续培养。反之，则需立即加入含血清的培养基以终止消化，并离心收集细胞。

替换胎牛血清品牌的步骤

当需要替换胎牛血清品牌时，通常使用10%的替代比例（90%培养基+10%新血清），某些细胞可能需要调整至5%或15%。推荐在使用新血清之前，首先用原品牌细胞复苏，传代1-2代稳定后，再按照25%-50%-75%-100%的步骤逐渐替换，并实时观察细胞状态，以确保细胞能够适应新品牌血清的变化。

显微镜下观察的“小黑点”是什么？

在显微镜下观察时，如果看到小黑点，可能意味着多种情况，如细菌或真菌污染、细胞碎片，甚至是胎牛血清中的沉淀物。为了确认和排除污染，需在高倍显微镜下仔细观察黑点的移动情况及其形态，必要时采取适当措施进行处理。

血清灭活的必要性及方法

对大多数细胞培养而言，血清加热灭活并非必须。然而，在进行免疫学研究或特定类型细胞的培养时，推荐使用灭活血清。如果必须灭活，应在56℃下加热30分钟，并持续摇匀，以避免影响血清质量。

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