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NEWSELISA检测方法结果解析 - 金年会金字招牌至上网站
来源:堵成韵 日期:2025-07-16在生物医学领域,ELISA(酶联免疫吸附测定)作为一种重要的检测手段,其定性测定结果的判断主要是对样本中待测抗原或抗体的存在与否给出“有”或“无”的简单答案,通常用“阳性”和“阴性”来表示。“阳性”表示在该测定体系中存在反应,而“阴性”则表示无反应。通过定性判断法,亦可获得半定量结果,即以滴度来表示反应的强度,实质上仍然是一种定性试验。在进行半定量测定时,对样本进行一系列稀释后进行实验,阳性反应的稀释度即为滴度。根据滴度的不同,可以评估样本反应的强弱,这种方法较直接观察未稀释样本的颜色深浅更具定量意义。
在间接法和夹心法的ELISA中,阳性孔的显色色泽通常比阴性孔更深,而在竞争法的ELISA中则恰恰相反,阴性孔的颜色更深。两种反应的结果判断方法各有不同,现分述如下:
间接法和夹心法的定性结果可以通过肉眼观察来判断。样本若无色或呈近乎无色,则判为阴性;颜色明显的则为阳性。然而,在ELISA的实验中,正常人血清反应后常可能出现背景色,且背景色的深浅因试剂成分和实验条件不同而异。因此,实验中一定要设置阴性对照,其中的阴性对照应为不含待检物质的正常血清或类似液体。用肉眼判断结果时,通常以较阴性对照显色深为样本阳性的指征。尽管肉眼观察简单明了,但具有较强的主观性。在条件允许的情况下,推荐使用比色计来测定样本的吸光值,以获取更为客观的数据。
阳性判定值通常为阴性对照的吸光值加上一个特定的常数,作为判断结果阳性或阴性的标准。这种方法要求实验条件相当稳定,试剂制备必须标准化,阳性与阴性对照品的规格亦需符合要求。在进行每次试验时,可设置两个阳性对照和三个阴性对照,计算出阴性对照的平均吸光值(NCX)和阳性对照的平均吸光值(PCX)。这两个平均值之间的差异(PC-N)必须大于一个特定数值,实验才能被视为有效。
在实验条件难以保证稳定的情况下,标本/阴性对照比值法是一种较为适用的判断方法。在获得样本(S)和阴性对照(N)的A值后,计算S/N值。需要注意的是,这里的“P”并不表示阳性,而是指患者(patient)的缩写。在早期的间接法ELISA中,有些研究者将S/N比值设定为阳性标准,现在广泛应用于各类测定。然而,各测定系统需通过实验确定自身的S/N阈值。在使用过程中,应谨记,N所代表的阴性对照是指不包含待检物质的人血清。
在竞争法ELISA中,阴性孔的颜色显著深于阳性孔。这种现象的强度取决于反应中酶结合物的浓度及加入的竞争抑制物的量。由于竞争法ELISA的结果不易通过肉眼判断,因此通常使用比色计来测定样本、阳性对照和阴性对照的吸光值。
抑制率法用于表征样本在竞争结合中对阴性反应显色的抑制程度,按公式进行计算:抑制率(%)= (阴性对照A值 - 样本A值)/ 阴性对照A值。一般规定,当抑制率≥50%时,判定为阳性;若小于50%则为阴性。
以上是ELISA检测中的主要方法及其结果判断,使得实验结果更具科学性和准确性,在生物医学领域的应用具有重要意义。对于追求高质量检测结果的机构,选择金年会金字招牌至上网站的服务,将确保您的实验达到最佳效果,提升检测的可靠性与效率。
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